Uso de Ensayos Inmunológicos (ELISA) para la Identificación de Virus PMWaV Asociado a la Marchitez Roja en la Piña (Ananas comosus) en Puerto Rico.

Gabriela Silva-Pumarada, Lorena L. Simbana, Lydia I. Rivera

Problema Especial - PROC 4995 - AP-102

Ananas comosus             

• Proviene de América del Sur, de las regiones de Brasil y Paraguay.
• Desde principios del siglo 20, el cultivo pasó a ser uno de los cultivos frutales más importantes en Puerto Rico.
•  La piña se siembra mayormente en los paîses de Costa Rica, Brasil y las Filipinas.
• Entre las variedades de piña que son cultivadas en Puerto Rico, las más comunes son las variedades de la “Cabezona” y MD-2.
• Relación simbiótica con las hormigas
• Patógenos comunes de A. comosus varían entre los hongos, bacterias y virus. 

Dyscomycoccus spp.

La presencia de cochinillas, también conocidas como el “chinche harinoso”, tiende a ser indicativo de transmisores del PMWaV cuando es encontrada en los tejidos de la piña.

Las especies más comúnmente asociadas al PMWaV son el Dyscomycoccus brevipes y Dyscomycoccus neobrevipes.

Virus nunca se ha reportado en Puerto Rico pero el vector si.

Pineapple Mealybug Wilt Associated Virus (PMWaV) -

Marchitez Roja en la piña.

• Transmitido por el vector de la cochinilla (Dyscomycoccus spp.) 
• Contiene varias cepas, la cepa PMWaV-1 hasta la PMWaV-5. 
• La cepa del virus PMWaV-1 es asociada a las reducciones en crecimiento y rendimiento de la piña. Esta cepa del virus PMWaV es limitada al floema y puede ser detectada en las raíces, hojas, tallos, “fruit cores” y coronas de las plantas infectadas.

CRONOGRAMA

Revisión de literatura 

 Viaje de campo

Visita a Atenas Pineapple en Manatí - Recolección de muestras

Pruebas ELISA

Prueba negativa para Potyvirus

Análisis de datos

Area de Muestreo

• Empresa Atenas  Pineapple Manatí
• 1,200 cuerdas en total - 500 cuerdas alquiladas por la Autoridad de Tierras y 700 cuerdas del Municipio de Manatí.
• Predio 18 & Predio 12

Metodología

Muestras de tejido vegetal

• 2 Hojas
• Tejido verde y blanca
• Tejido de raíz

Prueba ELISA 1.2

• Micropipetas
• Tabletas PNP
• Savia (Muestras)
• Controles POS (+) y NEG (-)

7 Muestras

Codificación de las muestras utilizadas en la prueba de ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA), maceradas con buffer.

Resultados

Imagen colorimétrica del plato de la prueba de ensayo por immunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) llevada a cabo el 28 de septiembre del 2018. 

Prueba ELISA para Potyvirus en Piña (Ananas comosus) llevada a cabo el 28 de septiembre del 2018. 

Resultados

Hoja Piña #2 - Sección Verde  

Muestra HV2

12.5%

Muestra de Raiz de Piña #2 - Sección Fina 

Muestra RF2

75%

Hoja Piña #1 - Sección Verde 

Muestra HV1

12.5%

Lecturas más altas fueron de 0.283, 0.246, 0.236, 0.231, 0.229, 0.227, 0.219. Estas lecturas corresponden a las muestras de HV1, RF2, HV1, HV1, HV1, HV2, HV1.

Trabajos Futuros

Microscopía Electrónica (TEM)

UPR-Mayagüez

Extracción ARN y RT-PCR

Tissue Immunoblot Essay

Colaboración con Dr. John S Hu de la Universidad de Hawaii en Honolulu.

¡GRACIAS!

Agradezco al Departamento de Ciencias Agroambientales, a la Empresa Atenas Pineapple, al equipo de Laboratorio de AP-102 y P-108, a la Dra. Lydia I. Rivera, a Agro. Lorena L. Simbana y al Agro. Victor M. González.